Tân Tiếu Ngạo Giang Hồ xoay quanh Đông Phương Bất Bại thật (Diệp Chính Minh) và Đông Phương Bất Bại giả (Trương Vũ Kỳ). Vì chưa luyện thành Quỳ Hoa Bảo Điển để đối phó Nhậm Ngã Hành (Doãn Tử Duy) nên Đông Phương Bất Bại thật đã tìm 12 thế thân còn mình thì ở ẩn để tiếp tục luyện công. Ai ngờ, Quỳ Hoa Bảo Điển chỉ có người nữ thực thụ mới luyện thành, vì thế Đông Phương Bất Bại thật đã trao cơ hội này cho nhân vật mà Trương Vũ Kỳ đảm nhận rồi ra ứng chiến và chết trong tay Nhậm Ngã Hành. Cuối cùng, Đông Phương Bất Bại giả đã đánh bại Nhậm Ngã Hành rồi thống nhất giang hồ dễ như trở bàn tay.